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干扰大鼠局灶性脑缺血模型BNIP3的表达研究PARP-

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作者:管理员。 TAGS:研究,表达,模型,干扰,病毒,缺血,
   缺血性脑血管病,是指由于各种原因导致的脑血管堵塞,致使脑血管功能障碍,引起相关症状,极大地危害着人类健康。局灶性缺血性脑损伤目前除溶栓外仍没有有效的治疗手段 [1-2] 。本实验在大鼠局灶性脑缺血模型水平,通过抑制 BNIP 3 的表达,进一步证实不依赖 caspase
的凋亡过程中PARP-1的作用,及探讨其与Bcl-2家族的促凋亡蛋白BNIP3等重要死亡信号的关系,研究在动物模型水平的necroptosis细胞死亡机制。现报告如下。

1 资料与方法

1.1  一般资料:健康雄性SD大鼠,体重(250±20g,由徐州医学院实验动物中心提供;慢病毒购自吉凯公司。

1.2  实验方法:①分组:60只雄性SD大鼠随机分假手术组、模型组、空病毒组、慢病毒组(每组15只),分别侧脑室注射给药。②包装病毒:Western Blot方法外源筛靶、内源筛靶,选择最有效的靶点。设计PARP-1基因(NM-199089siRNA序列的shRNAs结构单链寡核苷酸,并合成shRNA结构,连接酶切慢病毒载体,构建携带PARP-1-shRNA慢病毒质粒载体,PCR及测序鉴定后,Western blot筛选携带最佳慢病毒质粒载体,利用慢病毒包装质粒(pHelper 1.0pHelper 2.0)制备成PARP-1-shRNA慢病毒[3]。选用侧脑室局部注射法使PARP-1-shRNA慢病毒吸附注入大鼠中枢神经系统内[4]。③MCAO建模:大鼠于侧脑室注射后第4天,对假手术组、模型组、空病毒组及慢病毒组的大鼠分别制做对照模型和大脑中动脉缺血模型。模型组分离ECACCAICA,结扎,阻断

[论文网 lunwen.nangxue.com]MCA的血流。缺血时间为2 h,再灌注时间为24 h。假手术对照组只分离而不结扎[5]④检测:Western Blot分别检测再灌注后各组缺血脑组织24 h72 h96 h1周的BNIP3PARP-1表达水平,按Longa5分法对大鼠神经功能缺失评分[6]

1.3  统计学方法:所有数据经过方差齐性检验和正态性检验,采用SPSS 13.0统计软件包对数据以均数±标准差( )表示,以P0.05为差异有统计学意义。

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